CRISPR/Cas9基因敲除,敲入怎么做,原理
1、依靠一个复合物,该复合物能在一段RNA指导下,定向寻找目标DNA序列,然后将该序列进行切除。
2、这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入。在该修复路径中,需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板、特异的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中。
3、CRISPR-Cas9的广泛应用:基因敲除(Knock-out)Cas9可以对靶基因组进行剪切,形成DNA的双链断裂。在通常情况下,细胞会采用高效的非同源末端连接方式(NHEJ)对断裂的DNA进行修复。